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深圳瑞清生物信息科技有限公司
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产品展厅
土壤中性磷-酸酶(S-NP)活性测定试剂盒
  • 品牌:瑞清
  • 产地:深圳
  • 型号:100管/96样
  • 货号:RQ-S1811
  • 发布日期: 2023-08-23
  • 更新日期: 2024-12-06
产品详请
产地 深圳
保存条件
品牌 瑞清
货号 RQ-S1811
用途 用于科研实验使用
检测方法 微量法
保质期
适应物种
检测限
数量
包装规格 100管/96样
标记物
样本
应用 仅供科研使用
是否进口

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮

含量、有效磷含量和pH的显著影响,根据最适PH范围,一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。

测定原理:

中性环境中,S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。 用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 576μL 无水乙醇(自备),24μL 蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1 瓶,0.5 μmol/mL 酚标准液,4℃保存。

催化反应:

称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇 15min;加400μL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。

显色反应:

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充

分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30min,于660nm测定吸光度,记为A 空白管。

3. 标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充

分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30min,于660nm测定吸光度,记为A标准管。

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充

分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温 25℃ 30min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

 

S-NP 活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为1个酶活单位。

S-NP(nmol/d/g)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为1个酶活单位。

S-NP(nmol/d/g)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V 总÷W÷T= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

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