- 品牌:瑞清
- 产地:深圳
- 型号:100管/96样
- 货号:RQ-S1811
- 发布日期: 2023-08-23
- 更新日期: 2024-12-06
产地 | 深圳 |
保存条件 | |
品牌 | 瑞清 |
货号 | RQ-S1811 |
用途 | 用于科研实验使用 |
检测方法 | 微量法 |
保质期 | |
适应物种 | |
检测限 | |
数量 | |
包装规格 | 100管/96样 |
标记物 | |
样本 | |
应用 | 仅供科研使用 |
是否进口 | 否 |
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮
含量、有效磷含量和pH的显著影响,根据最适PH范围,一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。
测定原理:
中性环境中,S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。 用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 576μL 无水乙醇(自备),24μL 蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)
标准品:液体×1 瓶,0.5 μmol/mL 酚标准液,4℃保存。
催化反应:
称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇 15min;加400μL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。
显色反应:
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充
分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30min,于660nm测定吸光度,记为A 空白管。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充
分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30min,于660nm测定吸光度,记为A标准管。
4. 测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充
分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温 25℃ 30min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
S-NP 活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为1个酶活单位。
S-NP(nmol/d/g)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为1个酶活单位。
S-NP(nmol/d/g)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V 总÷W÷T= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W