犬利什曼原虫抗体Leishimaria Ab elisa试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗原一-步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA) 。往预先包被病毒抗ti的包被微孔中,依次加入标本、HRP标记的检测抗原,经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在suan的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450NM波长下测定吸光度(OD值) ,与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪病毒(BVDV) 的存在与否。

样品收集、处理及保存方法

1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆: EDTA、柠檬suan盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液: 3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转 离心10分钟取上清。

5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20°C, 避免反

复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1.酶标仪(450NM)

2.高精度加样器及枪头: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒温箱

操作注意事项

1.试剂盒保存在2-8°C,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完quan溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3.预处理后的样本请按照操作步骤用样ben稀释ye适当稀释以达到试剂盒的检测效果。.

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

常用方法:

1. 夹心法:

夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗ti,与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗ti,加入带有酶的二次抗ti,与一次抗ti键结

e. 洗去多余未键结二次抗ti,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果

原理:针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗ti分别作为固相抗ti和酶标抗ti,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗ti,一般的操作步骤为:

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗ti,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

c. 洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗ti,与待测的一次抗ti键结。

d. 洗去多余未键结二次抗ti,加入酶底物使酶呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可 测量待测抗ti的含量。

原理:利用酶标记的抗抗ti以检测已与固相结合的受检抗ti。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗ti数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗ti就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗ti键结,即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少,显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗ti的抗原,或是不易得到足够的纯化抗ti以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。

免责声明:

1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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